چکیده
بیماری ویروسی لکه سفید از جمله بیماری‌هایی بوده که در طول 15 سال گذشته منجر به تحمیل هزینه‌های هنگفتی به صنعت تکثیر و پرورش میگو شده است. با توجه به عدم امکان درمان این بیماری، تشخیص به موقع و سریع بیماری در مراکز تکثیر و پرورش میگو با استفاده از کیت‌های تشخیص مولکولی PCR از جمله روش‌های پیشگیری از شیوع بیماری است. از سوی دیگر با توجه به عدم وجود محصول داخلی با کارایی تشیخص بالا، بیشتر مراکز آزمایشگاهی آبزیان در کشور بالاجبار از محصولات وارداتی نظیر کیت تشخیص بیماری ویروسی لکه سفید IQ2000-WSSV استفاده می‌نمایند. در این مطالعه سعی شد بر اساس توالی‌های مربوط به سویه‌های مختلف ویروس لکه سفید (چین، تایلند، تایوان و کره) و پروتئین‌های بیماریزای ویروس (VP28, VP19) پرایمر‌های مختلف طراحی گردند. همزمان پس از بهینه سازی درجه حرارت و تنظیم سیکل‌های واکنش زنجیره‌ای پلیمراز هر یک از پرایمر‌های طراحی شده، محصولی تولید شد که قادر به تشخیص یک کپی از ویروس لکه سفید در نمونه با دقت بالا همراه با تکرار پذیری و اختصاصیت می‌باشد. این محصول قادر است در مدت زمان حداکثر 5/3 ساعت از زمان استخراج DNA ویروس شناسایی را انجام دهد. کیت مولتی‌پلکس طراحی شده حاول یک بافر M و P همراه با نمونه‌های کنترل مثبت و منفی می‌باشد. دستورالعمل اجرایی کیت طراحی شده جهت شناسایی ویروس بدین صورت است که بعد از مخلوط نمودن 15 میکرولیتر بافر M و 14 میکرولیتر بافر P به ازای هر نمونه در میکروتیوب‌های 2/0 میلی‌لیتری استریل و افزودن 1 میکرولیتر DNA استخراج شده از نمونه‌های مجهول با غلظت 400-200 نانوگرم/میکرولیتر، مثبت بودن نمونه‌ها مشروط به تکثیر هر یک از قطعات 615، 300 و 200 جفت باز و منفی بودن آنها ناشی از روئت قطعه 999 جفت است.